Northern Blot en la Entamoeba histolytica

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Se da mediante el prototipo de LINEs(humana) y en la cual se emplea un cebador: EhLINE1, ya que esta codifica el ORF1, pero si está completa y si no está completa se asigna a un dominio la hace lo siguiente.:

Extraen al ARN de total de trofozoítos de E. Histolytica. Las muestras de ARN (20 – 30 ug) se cargaron en un gel de agarosa y transferido a una membrana de nylon. La hibridación fue a 65 °C con una sonda [α-32 P]dATP, la cual se utilizó el kit de etiqueta de AND DecaLabel, que se basa en el método de cebado aleatorio. La membrana se lavó dos veces con 2 SSC a RT durante 5 min, luego dos veces con 1 SSC y 1% SDS a 65°C durante 30 minutos y, finalmente, dos veces con SSC0.1 a RT durante 30 minutos para eliminar la sonda no unida específicamente. Por último, los dNTPs (nucleótidos que generan nuevas cadenas) se eliminaron con el kit de eliminación de nucleótidos (Qiagen).

Bibliografía

Kaur D, Agrahari M, Shekhar Sing S, Kumar Mandal P, Bhattacharya A, Bhattacharya S. Transcriptomic analysis of Entamoeba histolytica reveals domain-specific sense strand expression of LINE-encoded ORFs with massive antisense expression of RT domain. ELSERVIER [Internet]. 2021 [citado 9 de enero del 2022]; 1: 3 – 4. Disponible en: Kaur D, Agrahari M, Shekhar Sing S, Kumar Mandal P, Bhattacharya A, Bhattacharya S. Transcriptomic analysis of Entamoeba histolytica reveals domain-specific sense strand expression of LINE-encoded ORFs with massive antisense expression of RT domain. ELSERVIER [Internet]. 2021 [citado 9 de enero del 2022]; 1: 3 – 4. Disponible en: https://www.researchgate.net/profile/Shashi-Singh-5/publication/349103338_Transcriptomic_analysis_of_Entamoeba_histolytica_reveals_domain-specific_sense_strand_expression_of_LINE-encoded_ORFs_with_massive_antisense_expression_of_RT_domain/links/601f3127a6fdcc37a80b14e8/Transcriptomic-analysis-of-Entamoeba-histolytica-reveals-domain-specific-sense-strand-expression-of-LINE-encoded-ORFs-with-massive-antisense-expression-of-RT-domain.pdf