Northern Blot en la Entamoeba histolytica

https://www.youtube.com/watch?v=K6mo60lDepU

Se da mediante el prototipo de LINEs(humana) y en la cual se emplea un cebador: EhLINE1, ya que esta codifica el ORF1, pero si está completa y si no está completa se asigna a un dominio la hace lo siguiente.:

Extraen al ARN de total de trofozoítos de E. Histolytica. Las muestras de ARN (20 – 30 ug) se cargaron en un gel de agarosa y transferido a una membrana de nylon. La hibridación fue a 65 °C con una sonda [α-32 P]dATP, la cual se utilizó el kit de etiqueta de AND DecaLabel, que se basa en el método de cebado aleatorio. La membrana se lavó dos veces con 2 SSC a RT durante 5 min, luego dos veces con 1 SSC y 1% SDS a 65°C durante 30 minutos y, finalmente, dos veces con SSC0.1 a RT durante 30 minutos para eliminar la sonda no unida específicamente. Por último, los dNTPs (nucleótidos que generan nuevas cadenas) se eliminaron con el kit de eliminación de nucleótidos (Qiagen).

Bibliografía

Kaur D, Agrahari M, Shekhar Sing S, Kumar Mandal P, Bhattacharya A, Bhattacharya S. Transcriptomic analysis of Entamoeba histolytica reveals domain-specific sense strand expression of LINE-encoded ORFs with massive antisense expression of RT domain. ELSERVIER [Internet]. 2021 [citado 9 de enero del 2022]; 1: 3 – 4. Disponible en: Kaur D, Agrahari M, Shekhar Sing S, Kumar Mandal P, Bhattacharya A, Bhattacharya S. Transcriptomic analysis of Entamoeba histolytica reveals domain-specific sense strand expression of LINE-encoded ORFs with massive antisense expression of RT domain. ELSERVIER [Internet]. 2021 [citado 9 de enero del 2022]; 1: 3 – 4. Disponible en: https://www.researchgate.net/profile/Shashi-Singh-5/publication/349103338_Transcriptomic_analysis_of_Entamoeba_histolytica_reveals_domain-specific_sense_strand_expression_of_LINE-encoded_ORFs_with_massive_antisense_expression_of_RT_domain/links/601f3127a6fdcc37a80b14e8/Transcriptomic-analysis-of-Entamoeba-histolytica-reveals-domain-specific-sense-strand-expression-of-LINE-encoded-ORFs-with-massive-antisense-expression-of-RT-domain.pdf

 

 

 

 

PCR por bucle para la detección de Entamoeba histolytica

https://www.youtube.com/watch?v=P9jCWYtJKWw

Para este PCR utilizaren cebadores, los cuales son:
   - Cebadores internos Eh1-FIP y Ehd1-BIP a 1,6 micrómetro (um)
   - Cebadores externos Ehd1-F3 y Ehd1-B3 a 0,2 micrómetro (um)

1. Separación: se realizó a 63°C durante 120 min.

2. Hibridación: la mezcla se calentó a 90°C durante 1 min para detectar la reacción.

3. Extensión: evaluaron mediante electroforesis usando gel agarosa a 2% o detección fluorescente, lo cual se aprobó con AND extraído de disolución seriados de    veces de los trofozoítos E. histolytica que están en un rango de 10⁶ a célula 10^-1/ ml en la muestra.

Bibliografía

Liang, S. Chan, Y. Hsia, K. Lee, J. Kuo, M. Hwa, K. et al. Development of Loop-Medialed Isothermal Amplification Assay for Detection of Entamoeba histolytica.[Internet] Journal of Clinical Microbiology. [citado 26 de diciembre del 2021]. Disponible en: https://journals.asm.org/doi/full/10.1128/JCM.00105-09

Extracción del ácido nucleico (ADN)

https://www.danagen.es/wp-content/uploads/2018/11/esquema_spin_plant.png

  Pasos básicos para la extracción del ácido nucleico:

1. Lisis celular: se destruye la membrana celular para liberar el contenido de la célula empleando detergentes. 

2. Desproteinización: se elimina las proteínas usando disolventes orgánicos como el fenol y cloroformo. De repente se puede hacer el proceso de incubar con proteasas (enzimas que eliminan las proteínas).

3. Precipitación del ADN: se obtiene ADN purificado y se procede a utilizar el alcohol (etanol o isopropanol) con asistencia de sales, efectuando la precipitación del ADN.  (1)

Bibliografía 

1. Brucil S. Integridad de los ácidos nucleicos extraídos de tejido procesado con formol e incluido en bloqueos de parafina [Internet] Quito;2021 [citado 19 diciembre 2021]. Disponible en: http://www.dspace.uce.edu.ec/bitstream/25000/24667/1/UCE-FCM-CPO-BRUCIL%20SANDRA.pdf

Normas de bioseguridad

 

Debido a la pandemia por el COVID - 19, los estudiantes tuvieron que cambiar la forma de estudio, por la cual, sus clases presenciales pasaron a ser virtuales. Hoy en día la mayoría de personas, tanto, docentes, estudiantes y padres de familias se han vacunado, gracias a esto podemos tener un retorno paulatino a clases presenciales, en el caso de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Central del Ecuador se aprobó el regreso a los laboratorios, para lo cual toca seguir unas normas básicas de bioseguridad, las cuales son: 

1. Obligatorio el uso de mascarilla.

2. Distanciamiento social de 2 metros en la entrada y salida del laboratorio, respetando el aforo del 50%.

3. Obligatorio tener EPP (Equipos de Protección Personal), las cuales son: lavarse las manos, mascarilla, gafas, guantes, gorro y cubre zapatos.

https://enlinea.santotomas.cl/wp-content/uploads/sites/2/2020/08/Uso-epp-en-pandemia-744x465.jpg

BIENVENIDA

 Bienvenidos a mi blog. Mi nombre es Anderson Simbaña, me encuentro estudiando en la Universidad Central del Ecuador, estudiando en la Facultad de Ciencias Médicas. En este blog se va tratar temas relacionados a la Materia de Biología Celular y Molecular